Фармакология взаимодействия регуляторных пептидных систем головного мозга в механизмах подкрепления

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1.Исследование эффектов введения антагонистов орексина в желудочки мозга для подкрепляющих свойств психоактивных веществ

Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия антагониста орексина SB-408124 (1 мкл на инъекцию) на подкрепляющие свойства фармакологических веществ. Исследования показали, что при системном введении фенамин (1 мг/кг, в/бр) на 32% повышал частоту нажатий педали в камере Скиннера (т.е. число нажатий педали за 10 мин) при регистрации реакции самостимуляции латерального гипоталамуса (табл. 1,2,3). А введение антагонистов орексина в обоих дозах (1мкг/мкл;10 мкг/мкл) в желудочек мозга снижало эффекты фенамина (число нажатий на педаль) (табл. 1,2).

Табл. 1. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, антагониста орексина SB-408124 (1мкг), рекомбинантного антагониста OX1R рецепторов Orexin B18-28 (1мкг) при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

До введения

После введения

Фенамин 1мг/кг, в/б

144,5±19

100%

216,25±26*

132%

143,25±18

100%

125±22

85,9%

SB-408124 1мкг/мкл, в/ж

78±10

100%

76±9

101%

89±11

100%

88±11

99%

Фенамин 1мг/кг, в/б + SB-408124 1мкг/мкл, в/ж

116,5±15

100%

129,75±18

115%

80±10

100%

68,5±12

96,8%

Orexin B_18-28 1мкг/мкл, в/ж

125,9±16

100%

123,3±16

98,8%

121.3±15

100%

120±15

100,1%

Фенамин 1мг/кг, в/б + Orexin B_18-28 1мкг/мкл, в/ж

264,4±33

100%

278,5±35

113,4 %

214,4±28

100%

212,5±30

103,8%

Напротив, оба антагониста орексина (1 мкг, в/ж) достоверно не меняли основных показателей при регистрации реакции самостимуляции в камере Скиннера (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции). При введении SB-408124 (1мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдается снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 115%, а пороги самостимуляции повышаются с 85,9% до 96,8%. При введении антагониста орексина Orexin B_18-28 (1мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), также наблюдается снижение эффектов фенамина. Число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 113,4%, а пороги самостимуляции повышаются с 85,9% до 103,8%.

Табл. 2. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, антагониста орексина SB-408124 (10мкг), Orexin B_18-28 (10мкг) при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

Довведения

После введения

Фенамин 1мг/кг, в/б

144,5±19

100%

216,25±26*

132%

143,25±18

100%

125±22

85,9%

SB-408124 10 мкг/мкл, в/ж

118±13

100%

121±10

103%

62±8

100%

58,7±5

98%

Фенамин 1мг/кг, в/б + SB-408124 10 мкг/мкл, в/ж

86,5±7

100%

97,1±9

109,6%

110±14

100%

118,3±15

105,1%

Orexin B_18-28 10 мкг/мкл, в/ж

93,9±10

100%

92,5±7

99,3%

141,7±11

100%

145±13

103%

Фенамин 1мг/кг, в/б + Orexin B_18-28 10 мкг/мкл, в/ж

134,8±16

100%

145,5±10

106,4 %

82,5±8

100%

86,1±6

103%

В дозе 10мкг/мкл оба антагониста орексина достоверно не изменяли основных показателей при регистрации реакции самостимуляции в камере Скиннера (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции). Однако при введении SB-408124 (10мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдается явное снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 109,6%, а пороги самостимуляции повышаются с 85,9% до 105,1%. При введении антагониста орексина Orexin B_18-28 (10мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), также наблюдается снижение эффектов фенамина. Число нажатий на педаль за 10 минут,относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 106,4%, а пороги самостимуляции снижаются со 122,9% до 103%.

Табл. 3. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, SB-408124 (0,1мкг), Orexin B_18-28 (0,1мкг) при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакциюсамостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

Довведения

После введения

Фенамин 1мг/кг, в/б

144,5±19

100%

216,25±26*

132%

143,25±18

100%

125±22

85,9%

SB-408124 0,1 мкг/мкл, в/ж

103,6±10

100%

105,1±9

101%

94±10

100%

92±10

99%

Фенамин 1мг/кг, в/б + SB-408124 0,1 мкг/мкл, в/ж

126,4±16

100%

149,9±17

129%

90±10

100%

104±12

117,6%

Orexin B_18-28 0,1 мкг/мкл, в/ж

95,7±12

100%

94,9±10

98,3%

85±10

100%

86,4±7

101 %

Фенамин 1мг/кг, в/б + Orexin B_18-28 0,1 мкг/мкл, в/ж

154,7±21

100%

203,4±18

133 %

135±14

100%

154,6±18

118,3%

В дозе 0,1 мкг/мкл оба антагониста орексина достоверно не изменяли основных показателей при регистрации реакции самостимуляции в камере Скиннера (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции). При введении антагонистов орексина (0,1 мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), не наблюдалось достоверное изменение эффектов фенамина (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции).

Опыты с условной реакцией предпочтения места проводили в прямоугольной двухкамерной экспериментальной установке размером 35*35*30 см, стороны которой различались цветом (темный и светлый) и текстурой пола и были разделены перегородкой с опускающейся и поднимающейся дверцей. Исследования влияния на выработку предпочтения места и экспрессию выработанного предпочтения места показали, что при внутрибрюшинном введении фенамин (1мг/кг) значительно повышал время нахождения животного в отсеке, в котором вводился препарат. На фоне блокады рецепторов орексина его антагонистами в дозах 1мкг и 10мкг эффект фенамина проявлялся в меньшей степени (табл. 4,5,6,7).

Табл. 4. Эффекты антагонистов орексина (1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

296±15

304±15

10±2

SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

285±26

315±27

11±3

Orexin B_18-28 1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

306±13

294±13

13±5

Orexin B_18-28 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

234±51

331±24*

11±3,5

Напротив, в опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места SB-408124 (1мкг) и Orexin B_18-28 (1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 315с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 11. При введении Orexin B_18-28 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 331с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось так же с 7 до 11.

Табл. 5. Эффекты антагонистов орексина (1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

301±15

299±15

10±4

SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

271±24

329±27*

11±3

Orexin B_18-28 1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

292±13

308±13

14±4

Orexin B_18-28 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

217±17

382±19,6*

10±3

В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места SB-408124 (1мкг) и Orexin B_18-28 (1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 329с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 11. При введении Orexin B_18-28 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 382с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось так же с 7 до 10.

Табл. 6. Эффекты антагонистов орексина (10мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

303±16

297±16

11±2

SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

282±21

318±20

8±2

Orexin B_18-28 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

301±10

299±9

6±2

Orexin B_18-28 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

276±36

324±18

13±3

В опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места SB-408124 (10мкг) и Orexin B_18-28 (10мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 318с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 8. При введении Orexin B_18-28 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 324с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось так же с 7 до 13.

Табл. 7. Эффекты антагонистов орексина (10мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

294±8

306±7

8±3

SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

264±21

336±23

11±4

Orexin B_18-28 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

299±11

301±9

10±2

Orexin B_18-28 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

242±15

358±14

7±3

В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места SB-408124 (10мкг) и Orexin B_18-28 (10мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 336с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 11. При введении Orexin B_18-28 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 358с, а число переходов из отсека в отсек не изменялось.

Табл. 8. Эффекты антагонистов орексина (0,1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

306±13

394±13

8±2

SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

196±20

404±22

7±2

Orexin B_18-28 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

303±11

297±12

11±3

Orexin B_18-28 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

185±33

415±19

12±3

В опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места SB-408124 (0,1мкг) и Orexin B_18-28 (0,1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении антагонистов орексина (0,1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) оба антагониста достоверно не влияли на эффекты фенамина.

Табл. 9. Эффекты антагонистов орексина (0,1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

308±11

292±10

7±2

SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

188±16

412±17

8±3

Orexin B_18-28 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

307±10

293±9

9±3

Orexin B_18-28 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

198±13

402±13

8±2

В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места SB-408124 (0,1мкг) и Orexin B_18-28 (0,1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении антагонистов орексина (0,1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б), оба антагониста достоверно не влияли на эффекты фенамина.

3.2.Исследование эффектов введения антагониста грелина в желудочки мозга для подкрепляющих свойств психоактивных веществ

Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия антагониста грелина (1 мкл на инъекцию) на подкрепляющие свойства фармакологических веществ. Исследования показали, что при системном введении фенамин (1 мг/кг, в/бр) на 32% повышал частоту нажатий педали в камере Скиннера (т.е. число нажатий педали за 10 мин) при регистрации реакции самостимуляции латерального гипоталамуса. А введение пептидного антагониста грелина – [D-Lys³]-GHRP-6 в дозе 1мкг/мкл в желудочек мозга снижало эффекты фенамина (число нажатий на педаль) (табл. 10).

Табл. 10. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, антагониста грелина – [D-Lys³]-GHRP-6 при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

Довведения

После введения

Фенамин 1мг/кг, в/б

144,5±19

100%

216,25±26*

132%

143,25±18

100%

125±22

85,9%

[D-Lys³]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж

86.25±11

100%

81±10

95.1%

91.8±12

100%

92.5±12

100%

Фенамин 1мг/кг, в/б + [D-Lys³]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж

89±11

100%

105,5±13

118%

53±7

100%

46,9±6

90,1%

[D-Lys³]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж

79±11

100%

73,5±8

94,6%

135,8±13

100%

138,1±10

102%

Фенамин 1мг/кг, в/б + [D-Lys³]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж

67±14

100%

81±9

128%

83,2±6

100%

104±5

125%

[D-Lys³]-GHRP-6 0,1 мкг/мкл, в/ж

88,2±9

100%

84±7

98,1%

96±10

100%

99±9

101%

Фенамин 1мг/кг, в/б + [D-Lys³]-GHRP-6 0,1 мкг/мкл, в/ж

92±11

100%

124±7*

128%

71±9

100%

90±6*

117%

Напротив, [D-Lys³]-GHRP-6 во всех трех дозах при внутрижелудочковом введении достоверно не влиял на показатели реакции самостимуляции в камере Скиннера. При введении [D-Lys³]-GHRP-6 в дозе 1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдалось снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 118%, а пороги самостимуляции снижаются со 122,9% до 90,1%. При введении антагониста грелина [D-Lys³]-GHRP-6 в дозе 10мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), показатели фенамина не изменялись. При введении [D-Lys³]-GHRP-6 в дозе 0,1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), эффект фенамина также достоверно не меняется.

Опыты с условной реакцией предпочтения места проводили в прямоугольной двухкамерной экспериментальной установке размером 35*35*30 см, стороны которой различались цветом (темный и светлый) и текстурой пола и были разделены перегородкой с опускающейся и поднимающейся дверцей. Исследования влияния на выработку предпочтения места и экспрессию выработанного предпочтения места показали, что при внутрибрюшинном введении фенамин (1мг/кг) значительно повышал время нахождения животного в отсеке, в котором вводился препарат. На фоне блокады рецепторов грелина антагонистом грелина – [D-Lys³]-GHRP-6 в дозах 1мкг эффект фенамина проявлялся в меньшей степени (табл. 11,12).

Табл. 11. Эффекты антагониста грелина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

[D-Lys³]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

301±11

299±11

9±3

[D-Lys³]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

268±34

332±33

10±3

[D-Lys³]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

306±12

294±11

10±2

[D-Lys³]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

182±28

418±28*

8±3

[D-Lys³]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

305±8

295±10

7±2

[D-Lys³]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

184±30

416±28

8±3

Напротив, в опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места [D-Lys³]-GHRP-6 при введении внутрижелудочково во всех трех дозах достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении антагониста грелина в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 332с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 10. При введении антагониста грелина в дозе 10мкг(в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) показатели фенамина не менялись. При введении [D-Lys³]-GHRP-6 в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, и число переходов из отсека в отсек, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), также достоверно не изменялось.

Табл. 12. Эффекты антагониста грелина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

[D-Lys³]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

293±14

307±14

9±3

[D-Lys³]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

240±21

360±24*

9±2

[D-Lys³]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

299±16

301±16

9±2

[D-Lys³]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

172±17

428±13

6±2

[D-Lys³]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

297±12

303±12

9±3

[D-Lys³]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

202±18

398±21

7±2

В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места антагонист грелина при введении внутрижелудочково во всех трех дозах достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении [D-Lys³]-GHRP-6 в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 360с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 9. При введении антагониста грелина в дозе 10мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) показатели фенамина достоверно не изменялись. При введении [D-Lys³]-GHRP-6 в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 398с, число переходов из отсека в отсек не изменялось.

3.3.Исследование эффектов введения астрессина в желудочки мозга для подкрепляющих свойств психоактивных веществ.

Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия астрессина (антагониста кортиколиберина) (1 мкл на инъекцию) на подкрепляющие свойства фармакологических веществ. Исследования показали, что при системном введении фенамин (1 мг/кг, в/бр) на 32% повышал частоту нажатий педали в камере Скиннера (т.е. число нажатий педали за 10 мин) при регистрации реакции самостимуляции латерального гипоталамуса. Астрессин при введении внутрижелудочково во всех трех дозах снижал число нажатий на педаль. А введение его в обоих дозах (1мкг/мкл; 10 мкг/мкл) в желудочек мозга снижало эффекты фенамина (число нажатий на педаль и пороги самостимуляции) (табл. 13).

Табл. 13. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, астрессина при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

Довведения

После введения

Фенамин 1мг/кг, в/б

144,5±19

100%

216,25±26*

132%

143,25±18

100%

125±22

85,9%

Астрессин 1мкг/мкл, в/ж

80±10

100%

57±7*

73%

79±10

100%

89±11

117%

Фенамин 1мг/кг, в/б + астрессин 1мкг/мкл, в/ж

85,5±11

100%

101,25±13

116,8%

89,4±11

100%

67,5±8*

80%

Астрессин 10мкг/мкл, в/ж

115,3±13

100%

81±11*

76%

142±15

100%

157,7±18

111%

Фенамин 1мг/кг, в/б + астрессин 10мкг/мкл, в/ж

125,7±13

100%

138±10

106,3%

71,1±8

100%

59,9±9

85%

Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж

114±6

100%

98±4

94%

119±8

100%

115,8±6

97%

Фенамин 1мг/кг, в/б + астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж

115,3±14

100%

136,4±10

126%

73,4±9

100%

87,3±6

121%

При введении астрессина в дозе 1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдалось снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 117%, а пороги самостимуляции снижаются со 85,9% до 80%. При введении астрессина в дозе 10мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), также наблюдается снижение эффектов фенамина. Число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 106%, а пороги самостимуляции не изменяются. При введении астрессина в дозе 0,1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), эффект фенамина достоверно не меняется.

Опыты с условной реакцией предпочтения места проводили в прямоугольной двухкамерной экспериментальной установке размером 35*35*30 см, стороны которой различались цветом (темный и светлый) и текстурой пола и были разделены перегородкой с опускающейся и поднимающейся дверцей. Исследования влияния на выработку предпочтения места и экспрессию выработанного предпочтения места показали, что при внутрибрюшинном введении фенамин (1мг/кг) значительно повышал время нахождения животного в отсеке, в котором вводился препарат. На фоне блокады рецепторов кортиколиберина астрессином эффект фенамина проявлялся в меньшей степени (табл. 14,15).

Табл. 14. Эффекты астрессина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

307±11

293±11

10±3

Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

249±33

351±37

9±4

Астрессин 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

293±11

307±11

7±2

Астрессин10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

272±30

328±32

12±3

Астрессин 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

302±7

298±7

8±2

Астрессин0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

202±25

398±28

10±3

В опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места астрессин при введении внутрижелудочково в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 351с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 9. При введении астрессина в дозе 10мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 328с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 12. При введении астрессина в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 398с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 10.

Табл. 15. Эффекты астрессина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)

Препарат

Время в отсеке без введения препаратов (с.)

Время в отсеке с в введением препаратов (с.)

Число переходов из отсека в отсек

Фенамин1мг/кг, в/б

175,4 ± 44

424,6±44*

7±2

Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б

297±15

303±15

13±4

Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

260±27,5

340±26,7*

8,6±1,8

Астрессин 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

308±8

292±9

11±2

Астрессин 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

281±21

319±23

5±2

Астрессин 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б

293±14

307±13

11±2

Астрессин0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б

212±17

388±18

5±2

В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места астрессин при введении внутрижелудочково в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 340с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 9. При введении астрессина в дозе 10мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 319с, число переходов из отсека в отсек при этом снизилось с 7 до 5. При введении астрессина в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 388с, число переходов из отсека в отсек снизилось до 5.

3.4.Взаимодействие орексина и грелина с антагонистом кортиколиберина (астрессином)

Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия орексина, грелина, астресина (антагониста кортиколиберина), а также их комбинации (1 мкл на инъекцию). Исследования показали, что орексин в дозе 10мкг (в/ж) и грелин при введении в дозах 1мкг и 10мкг (в/ж) повышали число нажатий на педаль за 10 минут (табл. 16,17).Астрессин в тех же дозах при внутрижелудочковом введении снижал число нажатий на педаль(табл. 16, 17). При этом одновременное введение орексина и астрессина (по 1мкг;по 10мкг, в/ж), так же как и грелина с астрессином (по 1мкг;по 10мкг, в/ж) все же снижали эффекты самостимуляции.

Табл. 16. Взаимодействие орексиновой, грелиновой и кортиколибериновой систем (по 1мкг) на примере реакции самостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

Довведения

После введения

Орексин 1мкг/мкл, в/ж

74±9

100%

77±11

107%

142±18,5

100%

151±21

105%

Грелин 1мкг/мкл, в/ж

85±10

100%

95±12

113%

126±16

100%

122±15

94%

Астрессин 1мкг/мкл, в/ж

80±10

100%

57±7*

73 %

79±10

100%

89±11

117%

Грелин 1мкг/мкл, в/ж+Астрессин 1мкг/мкл, в/ж

95,6±12

100%

80,9±9

84,8%

85±10

100%

97±12

101,6%

Орексин 1мкг/мкл, в/ж+Астрессин 1мкг/мкл, в/ж

72,2±9

100%

65,8±8

90,3%

99,4±12

100%

98,8±12

99%

При введении грелина (1мкг, в/ж) происходило повышение числа нажатий на педаль животными на 13%, а пороги самостимуляции снизились на 6%. При введении астрессина (1мкг, в/ж) происходило резкое снижение числа нажатий на педаль животными на 27%, при этом пороги самостимуляции повышались на 17%. При введении комбинации препаратов астрессина (1мкг, в/ж) и грелина (1мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 15%, при этом пороги самостимуляции достоверно не изменялись. При введении комбинации препаратов астрессина (1мкг, в/ж) и орексина (1мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 10%, при этом пороги самостимуляции достоверно не изменялись.

Табл. 17. Взаимодействие орексиновой, грелиновой и кортиколибериновой систем (по 10мкг) на примере реакции самостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

Довведения

После введения

Орексин 10 мкг/мкл, в/ж

60,1±12

100%

71,8±15

119,7%

78,1±16

100%

84,1±10

106%

Грелин 10 мкг/мкл, в/ж

58,1±4

100%

68,1±5

118,3%

80,6±5

100%

81,3±7

101,5%

Астрессин 10 мкг/мкл, в/ж

52,2±3

100%

34,2±2

66,5%

48,1±7

100%

66,9±9

139,3%

Грелин 10 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 10 мкг/мкл, в/ж

86±7

100%

63,8±9

74%

87±10

100%

104±8

115%

Орексин 10 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 10 мкг/мкл, в/ж

74,9±4

100%

58,6±6

82%

85±8

100%

95,3±5

124%

При введении орексина (10мкг, в/ж) происходило повышение числа нажатий на педаль животными на 20%, при этом пороги самостимуляции повышались на 6%. При введении грелина (10мкг, в/ж) происходило повышение числа нажатий на педаль животными на 18%, а пороги самостимуляции достоверно не изменялись. При введении астрессина (10мкг, в/ж) происходило резкое снижение числа нажатий на педаль животными на 34%, при этом пороги самостимуляции повышались на 39%. При введении комбинации препаратов астрессина (10мкг, в/ж) и грелина (10мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 26%, при этом пороги самостимуляции повышались на 15%. При введении комбинации препаратов астрессина (10мкг, в/ж) и орексина (10мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 18%, а пороги самостимуляции повышались на 24%.

Табл. 18. Взаимодействие орексиновой, грелиновой и кортиколибериновой систем (по 0,1мкг) на примере реакции самостимуляции у крыс.

Вещество, доза

Число нажатий на педаль за 10мин

Пороги самостимуляции

(мкА)

До введения

После введения

Довведения

После введения

Орексин 0,1 мкг/мкл, в/ж

55±4

100%

58±6

105,1%

102,5±8

100%

101,8±5

100%

Грелин 0,1 мкг/мкл, в/ж

53,7±3

100%

55,2±2

103%

96,2±6

100%

95,6±4

99%

Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж

65±7

100%

61,6±3

95,3%

48,1±5

100%

51,2±4

106,8%

Грелин 0,1 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж

103,3±9

100%

102±7

98%

70±5

100%

70±5

100%

Орексин 0,1 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж

78,3±5

100%

80±8

101,9%

85±7

100%

86,4±6

101%

В опыта введения препаратов орексина, грелина и астрессина, а также их комбинаций в дозах по 0,1мкг внутрижелудочково результаты самостимуляции достоверно не менялись.